hTPO膜外区基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建
刘金泉1
肖茜2
李宁2
李进2
韩梅2
方佩华2
1.300052,天津医科大学总医院代谢病科2.天津医科大学总医院核医学科
摘要：目的:探索克隆人甲状腺过氧化物酶(hTPO)膜外区基因并构建其杆状病毒表达载体.方法:PCR扩增hT-PO膜外区基因,并将其先后重组入pGEM3zf(+)质粒和pFastBacl质粒,以hTPO-pFastBAC1质粒转染E.coli DH 10Bac大肠杆菌,获得重组hTPO杆状病毒表达载体(hTPO-Bacmid),每一步均以PCR及酶切、基因测序等方法鉴定其正确性.结果:与预期一致,PCR扩增hTPO膜外区基因的产物为一约2.5 kb的条带；hTPO-pGEM3zf(+)经EcoR Ⅰ+HindⅢ、EcoR Ⅰ+SalⅠ双酶切后均获得2.5和3.2 kb条带；hTPO-pFastBAC1以EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切得到2.5和4.8 kb的带,均符合预期.分别以重组hTPO-pGEM3zf(+)质粒、hTPO-pFastBAC1质粒为模板进行PCR扩增鉴定,均得到约2.5 kb的目的条带；对hTPO-Bacmid进行PCR鉴定,得到约4.8 kb的片段.对hTPO-pFastBAC1上下游接口测序正确无误.结论:本研究成功克隆了hTPO膜外区基因,并完成了其杆状病毒表达载体hTPO-Bacmid的构建.
关键词：碘化物过氧化物酶甲状腺遗传载体聚合酶链反应大肠杆菌基因克隆
资助基金：天津市自然科学基金(97370611)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 543-546 )
英文信息