雌激素受体α基因shRNAi慢病毒载体的构建与滴度测定
曾宪旭
班振英
党秋红
楚天骄
雷冬梅
1.450052,郑州大学第三附属医院病理科2.450052,郑州大学第三附属医院病理科3.450052,郑州大学第三附属医院病理科4.450052,郑州大学第三附属医院病理科5.450052,郑州大学第三附属医院病理科
摘要：目的:构建雌激素受体(ER)α基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,检测病毒感染细胞的滴度.方法:针对已经筛选确定的ERα基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCsil-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生 shERα-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用shERα-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果:PCR和测序证实,成功构建ERα shRNA的慢病毒载体shERα-LV.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108 TU/mL.结论:成功构建人ERα基因RNAi慢病毒载体,为ERα在乳腺癌发生发展中的研究提供了基础.
关键词：RNA干扰乳腺肿瘤雌激素受体α遗传载体质粒癌绿色荧光蛋白质类
资助基金：国家自然科学基金(30871390)河南省教育厅科学技术研究重点项目(12A310007)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1107-1109 )
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