慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究
王力1
张宁坤2
徐小红2
郑楠2
高连如2
朱智明2
1.北京，第二军医大学海军临床医学院 100048; 中国人民解放军海军总医院心脏中心2.中国人民解放军海军总医院心脏中心
摘要：目的构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和apelin基因的重组质粒pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP并进行慢病毒包装，探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数（MOI）值及目的基因表达情况。方法化学合成目的基因片段并扩增。采用In-Fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接，转化入感受态DH5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293T细胞，包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同MOI值转染人脐带间充质干细胞，根据转染效率得到最佳MOI值，并采用Real-time-PCR及Western blot方法检测目的基因表达情况。结果通过PCR扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284 bp的目的基因片段，与慢病毒质粒载体连接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重组质粒，测序结果与预期完全符合，并成功包装慢病毒颗粒。最佳MOI值为20，转染效率为（90.32±3.61）%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mRNA及蛋白的表达。结论重组质粒慢病毒载体pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP可有效转染人脐带间充质干细胞，并可持续高表达apelin基因。
关键词：间质干细胞慢病毒属遗传载体转染基因表达apelin
资助基金：国家自然科学基金(81170094)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1137-1141 )
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