靶向血管平滑肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建及效果评价
崔丽
李广平
富华颖
王兴华
焦占全
1.天津医科大学第二医院心内科 3002112.天津医科大学第二医院心内科 3002113.天津医科大学第二医院心内科 3002114.天津医科大学第二医院心内科 3002115.天津医科大学第二医院心内科 300211
摘要：目的：设计合成有效的靶向Toll样受体4（TLR4）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体，并筛选出TLR4基因稳定沉默的血管平滑肌细胞（SMC）。方法依据RNA干扰（RNAi）序列设计原则，以TLR4基因为靶基因，合成3对小发夹RNA（shRNA）寡核苷酸链，经退火、与线性化pSilence 2.1-U6 neo质粒连接，酶切及测序进行鉴定。脂质体法转染血管SMC，新霉素（G418）加压筛选并收集稳定表达质粒的SMC。RT-PCR及Western blot法检测收集的SMC中TLR4 mRNA和蛋白表达，以确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果测序鉴定插入的发夹样序列正确，成功构建了TLR4基因siRNA表达载体；并获得了稳定沉默TLR4的血管SMC。RT-PCR及Western blot证实RNA干扰TLR4基因后，SMC中TLR4 mRNA和蛋白表达均明显减低，其中pSilence2.1-siTLR4-1的抑制作用最强。结论成功构建了靶向TLR4基因的siRNA表达载体，并有效抑制血管SMC中TLR4表达。
关键词：Toll样受体4RNA干扰RNA小分子干扰肌平滑血管逆转录聚合酶链反应免疫印迹法
分类号：R54(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：天津医科大学科学基金项目(项目编号2012KYQ04)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 113-115 )
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