针对人SND1基因两个AUG的细胞应激分析
高星杰1
何津岩2
葛林2
张毅3
付雪1
尹洁1
张纬2
史雪彬2
苏征2
姚智2
杨洁4
1.天津医科大学基础医学研究中心 邮编3000702.天津医科大学基础医学院3000703.天津医科大学药学院3000704.天津医科大学基础医学研究中心 邮编300070; 天津医科大学基础医学院300070
摘要：目的：针对人SND1基因2个蛋白翻译起始密码子AUG构建真核表达质粒pCMV-N-Flag-SND1-No1/2，并分析2个AUG在SND1应激颗粒形成中的作用。方法以SND1全长转录本为模板，PCR法扩增含BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的目的基因SND1-No1/2，双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pCMV-N-Flag，以T4-DNA连接酶将两者连接成pCMV-N-Flag-SND1-No1/2重组质粒，然后将构建的重组质粒转染入HeLa细胞内，以Western印迹法检测Flag标签（DYKDDDDK）与SND1-No1/2的融合表达，最后以细胞免疫荧光实验检测在氧化应激状态下Flag-SND1-No1/2融合蛋白与内源性SND1应激颗粒的胞内共定位情况。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误，Western印迹结果检测到融合蛋白Flag-SND1-No1/2的表达；细胞免疫荧光结果显示Flag-SND1-No1/2均可与内源性SND1应激颗粒共定位。结论重组pCMV-N-Flag-SND1-No1/2质粒构建成功，SND1基因第1个AUG的缺失并不影响SND1应激颗粒的形成。
关键词：重组融合蛋白质类应激质粒基因表达SND1AUG应激颗粒
分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)Q513(蛋白质)
资助基金：国家自然科学基金(31100967)国家自然科学基金(31170830)国家自然科学基金(31370749)国家自然科学基金(21305103)国家自然科学基金(31125012)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 625-629 )
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