表达microRNA-203 tough decoy的慢病毒载体构建及应用
刘涛1
王玉亮2
宋红丽3
付楠楠4
吴本娟4
沈中阳3
1.天津市第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室 300384; 器官移植中心2.天津市第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室 3003843.器官移植中心4.天津医科大学一中心临床学院
摘要：目的：建立表达microRNA（miRNA）tough decoy（TuD）的慢病毒载体构建方法，并检测其对细胞内miRNA表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆，首先构建miRNA TuD通用骨架质粒，进一步构建特异性针对大鼠miR-203的TuD表达载体。在293T细胞中包装成慢病毒后，感染大鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs），同时用pSIH1-H1-copGFP空质粒包装慢病毒，感染BM-MSCs作为对照。定量RT-PCR检测细胞中miR-203的水平变化，并用CCK-8法和Annexin V-PI双标记法分别检测BM-MSCs的活性和凋亡。结果成功构建了基于pSIH1-H1-copGFP质粒的miR-203 TuD表达载体，并对其序列进行了验证。用表达miR-203 TuD的重组慢病毒感染BM-MSCs后第3、6、9天检测细胞内源性miR-203表达水平降低，同时细胞活性增高，凋亡比例降低，与对照组相比差异有统计学意义。结论两步克隆法构建miRNA TuD表达载体是一种简便高效的方法，其表达产物能够有效抑制细胞内源性miRNA水平，同时影响细胞表型。
关键词：间质干细胞慢病毒属遗传载体质粒细胞凋亡微RNAs细胞活性miRNA-203 tough decoy
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(81270528)中国博士后科学基金(2013M541185)天津市应用基础与前沿技术研究计划(08JCYBJC08400)天津市应用基础与前沿技术研究计划(12JCZDJC25200)天津市应用基础与前沿技术研究计划(11JCZDJC27800)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 961-964 )
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