人脐带血造血干细胞体外分化为NK细胞的效率及功能检测
罗琦1
尹洁2
李杨2
黄珊2
王玺2
何景华1
1.天津医科大学基础医学院药理学教研室 邮编3000702.天津医科大学细胞生物学系
摘要：目的：检测人脐带血造血干细胞（HSCs）体外分化为自然杀伤（NK）细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离CD34+HSCs，接种于含20μg/L FMS样酪氨酸激酶3配体（Flt3L）、干细胞生长因子（SCF）、白细胞介素（IL）-7、IL-15及IL-21的SCGM培养基中，定向诱导CD34+HSCs分化为NK细胞。观察细胞生长状态，在分化的第7、14、21及28天，采用流式细胞术检测各阶段CD56、NKG2D、NKp46、CD3、CD19及CD34等细胞免疫表型的表达变化；分化的第21、28天，以分化得到细胞为效应细胞，K562细胞作为靶细胞，设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶14组效靶细胞比，分别采用乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测法和7AAD/CFSE标记法，检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的CD34+HSCs在体外适宜的条件下可大量增殖；整个分化进程的不同阶段中，CD3和CD19表达量差异无统计学意义，CD56、NKG2D及NKp46的表达量逐渐增加，最高达（72.57±1.60）%、（32.83±1.29）%和（29.53±2.40）%，CD34的表达量逐渐降低，最低为（12.13±2.01）%。LDH毒性检测法和7AAD/CFSE标记法测得最大杀伤效率可达（49.91±2.76）%和（40.87±1.12）%，8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组NK细胞杀伤能力均依次降低（P<0.05），诱导分化28 d的NK细胞杀伤能力与21 d差异无统计学意义。结论人脐带血HSCs在体外适宜的培养条件下，可定向分化为NK细胞，诱导分化得到的NK细胞具有杀伤功能。
关键词：胎血造血干细胞杀伤细胞天然免疫表型分型细胞毒性试验免疫CD34+HSCs体外分化细胞杀伤
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(2014CB910104)国家自然科学基金(81171899)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 225-228 )
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