miR-223敲减慢病毒的构建
张欣
关晓慧
王宝利
1.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室 邮编3000702.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室 邮编3000703.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室 邮编300070
摘要：目的：构建miR-223敲减慢病毒，为进一步研究miR-223的功能提供工具。方法采用Invitrogen公司miR-RNAi在线设计工具，根据miR-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体，经酶切连入pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体，构建了miR-223敲减慢病毒质粒，利用293T细胞将其包装成病毒，并感染ST2细胞，观察感染效率并用qRT-PCR检测miR-223成熟体表达。结果酶切鉴定及测序结果显示成功构建了miR-223敲减慢病毒载体，miR-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞，表达绿色GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%~90%，病毒滴度为1×109 PFU/mL，感染效率达90%。感染miR-223敲减慢病毒的细胞miR-223表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09），为阴性对照的31%，差异有统计学意义（n=3，t=15.091，P＜0.05）。结论成功构建了miR-223敲减慢病毒，为进一步研究miR-223的功能准备了条件。
关键词：微RNAs慢病毒属RNA干扰慢病毒源性载体miR-223
分类号：Q524.6(核酸)
资助基金：国家自然科学基金(81271977)国家自然科学基金(81472040)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 717-720 )
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