DOI: 10.11958/20160318
Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证
王珊1
李晓霞2
周杰3
王宝利3
1.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室 邮编300070; 天津医科大学基础医学院2.天津医科大学基础医学院3.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室 邮编300070
摘要：目的：构建核因子C（nuclear factor I-C，Nfic）基因3′非编码区（3′UTR）荧光素酶报告质粒，利用双荧光素酶报告基因验证microRNA-20a（miR-20a）与其潜在靶基因Nfic的靶向关系。方法通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-20a与Nfic基因3′UTR潜在的互补结合位点；PCR扩增出Nfic基因3′UTR序列，将此序列克隆至荧光素酶报告载体pMIR-Report Luciferase；将重组荧光素酶报告质粒与miR-20a mimics（实验组）或NC mimics（对照组）共同转染293-AD细胞，收集细胞后通过双荧光素酶报告系统检测2组细胞的荧光素酶活性，从而对Nfic与miR-20a的靶向调节关系进行鉴定。将miR-20a mimics和NC mimics分别转染骨髓基质细胞系ST2，裂解细胞提取蛋白后采用Western blotting检测NFIC蛋白的表达水平。结果构建的重组荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测显示，与对照组相比，miR-20a可以抑制Nfic 3′UTR报告基因载体的荧光素酶活性（P<0.05）；Western blotting结果显示，与对照组相比，ST2细胞转染miR-20a mimics后NFIC蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了Nfic基因3′UTR荧光素酶报告质粒,而miR-20a可以直接作用于Nfic基因3′UTR，抑制其荧光素酶活性。
关键词：微RNAs3′非翻译区miR-20aNfic骨髓基质细胞系荧光素酶报告基因
分类号：R349.6(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81271977)国家自然科学基金(81472040)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1065-1068 )
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