DOI: 10.11958/20160731
应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因
赵秀娟1
陈万标2
张沛涛1
张娜2
楚晓文3
白向阳4
杨冰1
吴旭东1
王玺1
1.天津医科大学基础医学院细胞生物学系 邮编3000702.天津医科大学生物医学工程与技术学院3.河北省保定市莲池区凌云街66350部队卫生队4.江阴迪林生物电子技术有限公司
摘要：目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达，针对p21基因作用的功能域，设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA（sgRNA），克隆入lentiCRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白，利用RT-qPCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lentiCRISPR v2-sgRNA重组慢病毒质粒。与对照组相比，筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞，应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株，为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。
关键词：横纹肌瘤p21基因敲除CRISPR/Cas9慢病毒
分类号：R73(肿瘤学)R349.64(基础医学)
资助基金：天津市高等学校科技发展基金(093-201301)天津市自然科学基金青年项目(16JCQNJC10300)天津市自然科学基金青年项目(16JCQNJC12100)国家自然科学基金(81500170)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1190-1194 )
英文信息