DOI: 10.11958/20170336
CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建
鲁卓林1
熊显佳2
吴云丹3
周慧4
贾军5
王双林6
武莉莉2
刘艺洁2
乔阳2
杨冰2
赵秀娟2
王青松2
韩春勇7
张玲2
孙琰2
1.天津市儿童医院药剂科 3001342.天津医科大学基础医学院3.中国人民解放军第二五四医院内分泌科4.天津医科大学药学院5.天津医院足踝二病区6.天津医科大学总医院心胸外科7.天津医科大学肿瘤医院乳房再造科,国家肿瘤临床医学研究中心,肿瘤防治重点实验室
摘要：目的 利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系.方法 构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sgRNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况.结果 测序结果 显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA表达载体插入序列完全正确.将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果 显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果 显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高.结论 通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系.
关键词：甲基化EZH2基因CRISPR/Cas9n系统基因编辑
分类号：R349.69(基础医学)R349.83(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81500170)国家自然科学基金(81472052)天津市自然科学基金(15JCYBJC25400)天津市自然科学基金(16JCQNJC12100)天津市自然科学基金(16JCQNJC10300)天津市高等学校科技发展基金(20130103)天津医科大学肿瘤医院科研项目(B1516)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 449-453 )
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