DOI: 10.11958/20170531
人源性TRAb Fab段单克隆抗体的筛选和鉴定
杜晓明1
李宁2
方佩华2
1.天津市第四中心医院内分泌科 3001402.天津医科大学总医院核医学科
摘要：目的 通过噬菌体表面展示技术,运用已构建的人源性噬菌体抗体库,筛选、表达人源性促甲状腺激素受体抗体(TRAb)Fab段.方法 以人TSHR膜外区的氨基端(hTSHRn)、人TSHR膜外区的羧基端(hTSHRc)的融合蛋白为抗原,通过数轮"吸附-洗脱-扩增"富集噬菌体抗体,筛选阳性克隆.从已构建的抗体库中筛选到甲状腺刺激性抗体(TSAb)Fab、甲状腺阻断性抗体(TBAb)Fab,噬菌体(Phage)-ELISA检测选取阳性克隆,PCR及双酶切鉴定TRAb阳性克隆.检测可溶性TRAbFab片段阳性克隆的表达,Western blotting鉴定TRAb阳性克隆的免疫学活性,对TRAbFab阳性克隆进行测序分析.结果 经过5轮富集筛选,成功筛选到特异性TRAb(TSAb、TBAb)Fab噬菌体抗体,产率分别提高约77、94倍.通过Phage-ELISA检测,鉴定出了具有抗原结合活性的单克隆抗体,实现可溶性表达.Western blotting证实其免疫学活性.测序分析单克隆48的轻链可变区与人的免疫球蛋白轻链Vλ同源性达到94.4%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH4同源性为88.9%.克隆56的轻链可变区与人的免疫球蛋白轻链Vλ同源性达到95.6%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH3同源性为84.6%.结论 本研究通过成功筛选获得人源性TRAb(TSAb、TBAb)Fab片段的单克隆抗体.
关键词：受体促甲状腺素抗体单克隆免疫球蛋白Fab片段细菌噬菌体噬菌体展示库
分类号：R581(内分泌腺疾病及代谢病)
资助基金：天津市卫生局科技重点项目(2013KR04)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 851-855 )
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