DOI: 10.11958/20170865
FOXO3a调控线粒体自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用
宋虎1
张建军2
王振2
杜晨阳1
郑虹2
沈中阳2
1.天津医科大学一中心临床学院 3001922.天津市第一中心医院器官移植中心
摘要：目的 探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型.血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化,HE染色及TUNEL法观察肝组织损伤及细胞凋亡情况,Western blot及qRT-PCR检测各组细胞中转录因子FOXO3a、线粒体自噬相关蛋白Nix蛋白及其mRNA表达水平.培养小鼠肝AML12细胞,用FOXO3a和Nix干扰RNA处理细胞建立缺氧1.5 h复氧6 h的模型,分为siRNA-NC组(加入10μL siRNA空载对照转染细胞)、FOXO3a siRNA组(加入10μL FOXO3a siRNA转染细胞)以及Nix siRNA组(加入10μL Nix siRNA转染细胞).MTT法检测各组细胞活力,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬体的数量与分布,Western blot检测FOXO3a、Nix、微管相关蛋白LC3、凋亡蛋白P62及Caspase-3的表达情况.结果 IR各组ALT、AST均明显升高,且再灌注6 h时达到峰值(P<0.05).HE及TUNEL结果示再灌注6 h时小鼠肝组织损伤以及细胞凋亡最严重.IR各组FOXO3a及Nix的mRNA相对表达量均高于Sham组,且再灌注12 h时FOXO3a的mRNA表达量最高,再灌注6 h时Nix的mRNA表达量最高(P<0.05).Western blot示再灌注12 h时FOXO3a相对表达水平最高,再灌注6 h时Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ相对表达水平最高.干扰FOXO3a的表达后,MTT显示FOXO3a siRNA组细胞存活率降低(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组FOXO3a表达水平高于FOXO3a siRNA组,Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ表达水平明显低于FOXO3a siRNA组(P<0.05).共聚焦显微镜观察示siRNA-NC组细胞内自噬体的数量低于FOXO3a siRNA组.干扰Nix的表达后,MTT显示Nix siRNA组细胞存活率升高(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组Nix、P62、LC3Ⅱ表达水平高于Nix siRNA组,而FOXO3a表达水平低于Nix siRNA组(P<0.05).结论 FOXO3a可减轻小鼠肝缺血再灌注损伤,其机制可能与FOXO3a抑制肝细胞线粒体自噬且抑制细胞凋亡有关.
关键词：FOXO3a线粒体自噬缺血再灌注损伤凋亡
分类号：R657.3(外科学各论)R394.64(医学遗传学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2012AA021001)卫生公益性行业科研专项(201302009)天津市器官移植临床医学研究中心(15ZXLCSY00070)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1242-1247,前插1 )
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