DOI: 10.11958/20170967
携带小鼠KLF4基因重组慢病毒的构建及对RAW264.7细胞增殖的影响
杨红艳1
李鑫2
向国安3
王如刚1
蔡卫红1
罗虎1
梁婧1
姬文婕4
1.北京市疾病预防控制中心、北京市预防医学研究中心,1000132.中国人民武装警察部队总医院急诊科3.中国人民武装警察部队总医院呼吸科4.中国人民武装警察部队后勤学院附属医院呼吸与重症医学科
摘要：目的 构建小鼠Krüppel样因子4(KLF4)慢病毒表达载体,并建立KLF4过表达小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞株.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因KLF4后,构建重组质粒pLVX-KLF4,并通过PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定.重组质粒与pSPAX2、pMD2.G辅助质粒通过Lipofectamine?3000共转染293T细胞,包装病毒并测定病毒滴度.将获得的慢病毒感染RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测KLF4 mRNA的表达.分选流式细胞仪分选GFP阳性RAW264.7细胞.流式细胞术检测KLF4对RAW264.7细胞周期的影响.EdU法检测KLF4对RAW264.7细胞增殖的影响.结果 经PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠KLF4基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR证实Lenti-KLF4感染的RAW264.7细胞中KLF4 mRNA表达高于未感染的对照组RAW264.7细胞(P<0.05).初次浓缩后测定小鼠KLF4基因重组慢病毒的滴度为2.05×108 TU/mL.分选出KLF4过表达的RAW264.7细胞.KLF4过表达的RAW264.7细胞周期变化显示为S期延长,G0/G1期缩短.EdU检测显示KLF4过表达的RAW264.7细胞增殖活性增高.结论 成功构建了KLF4的慢病毒表达载体,并建立KLF4过表达的RAW264.7细胞株,KLF4过表达促进了RAW264.7细胞的增殖.
关键词：Krüppel样转录因子类慢病毒感染遗传载体细胞周期细胞增殖Krüppel样因子4
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81441101)国家自然科学基金(81570335)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
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