DOI: 10.11958/20190650
大鼠paralemmin-3基因重组慢病毒载体构建及其在肺泡巨噬细胞中的表达
唐俭1
陈旭昕2
樊重阳2
韩志海3
1.南方医科大学第二临床医学院 5105152.中国人民解放军总医院第六医学中心呼吸与危重症医学科3.南方医科大学第二临床医学院 510515;中国人民解放军总医院第六医学中心呼吸与危重症医学科
摘要：目的 构建大鼠paralemmin-3(PALM3)基因重组慢病毒载体,探讨转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383细胞的最佳感染复数(MOI)值及目的基因PALM3的表达情况.方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增鼠PALM3基因片段,并将其克隆到pCV186-Cherry载体上;经PCR及DNA测序鉴定后,将重组质粒pCV186-Cherry-PALM3、辅助包装质粒pHelper 1.0与pHelper 2.0共转染至293T细胞进行重组慢病毒lenti-CV186-Cherry-PALM3的包装,并用荧光标记法行滴度的测定.将不同MOI值(0、1、10、20、50)的lenti-CV186-Cherry-PALM3转染NR8383细胞,依据转染效率得到最佳MOI值,以此MOI值感染NR8383细胞,采用Western blot法检测目的基因的表达情况.结果 通过PCR扩增获得了大小约2246 bp的目的基因片段,并成功连接到pCV186-Cherry重组质粒上.PCR及DNA测序结果证实重组质粒pCV186-cherry-PALM3携带正确的鼠PALM3基因并成功包装重组慢病毒颗粒.重组慢病毒lenti-CV186-Cherry-PALM3的滴度测定为3×108 TU/mL,感染NR8383的最佳MOI为20,慢病毒lenti-CV186-Cherry-PALM3感染后NR8383细胞中PALM3的蛋白表达水平显著上调(P<0.05).结论 本实验成功构建了含大鼠PALM3基因的重组慢病毒载体lenti-CV186-Cherry-PALM3,并能在NR8383细胞中高效表达,为进一步研究PALM3对肺泡巨噬细胞极化的影响奠定了基础.
关键词：巨噬细胞肺泡paralemmin-3重组慢病毒载体急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征
分类号：R383.1(医学寄生虫学)
资助基金：国家自然科学基金(81300050)北京市自然科学基金(7182163)海军总医院创新培养基金项目(CXPY201417)后勤科研重点项目(BHJ16J011)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 673-677 )
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