DOI: 10.11958/20182209
HCV Core基因真核表达载体构建及其对HeLa细胞自噬的影响
王敏敏1
魏建宏2
任来峰3
1.山西医科大学汾阳学院护理系 0322002.山西医科大学汾阳学院基础医学部解剖教研室3.山西省肿瘤医院免疫室
摘要：目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(Core)真核表达载体,并研究其对人宫颈癌HeLa细胞自噬功能的影响.方法 以HCV复制子质粒pJFH1为模板,PCR法扩增HCV Core基因片段,经纯化回收后与PLVX-IRES-ZsGreen1载体用同源重组法相连,构建PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,并经测序验证其序列的正确性.转染宫颈癌HeLa细胞,并设PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组、PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组以及未转染质粒空白对照组,通过免疫印迹法验证HCV Core蛋白在HeLa细胞中的表达,并用免疫荧光(IF)和免疫印迹检测自噬生物标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平.结果 获得PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,测序结果表明构建的重组质粒序列完全正确,HCV Core重组蛋白可在HeLa细胞中有效表达;免疫荧光和免疫印迹结果表明,HCV Core过表达细胞LC3焦点和LC3Ⅱ蛋白表达水平明显增多,PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组的细胞LC3Ⅱ水平(1.069±0.049)高于PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组(0.776±0.047),差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建了PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒,HCV Core蛋白过表达可诱导HeLa细胞自噬.
关键词：丙型肝炎肝炎病毒属病毒核心蛋白质类自噬重组质粒
分类号：R34(基础医学)R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：山西省自然科学基金(2014021037-9)山西省大学生创新创业训练计划(2014052)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 683-687 )
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