DOI: 10.11958/20190215
基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究
杨念1
李琛2
李洪亮2
郑燕2
房树华3
汪选斌2
赵雅玮1
1.江苏大学附属句容医院药剂科 2120002.湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心中药药理实验室,生物医药研究院,武当特色中药研究湖北省重点实验室3.镇江市第一人民医院
摘要：目的 构建固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)启动子双荧光素酶报告基因表达载体,为研究针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础.方法 利用生物信息学软件,对SREBP1基因5′端上游5000 bp序列进行启动子预测与分析.应用Gibson Assembly方法构建启动子双荧光素酶载体,并将构建成功的pGL3-SREBP1-pro重组质粒和内参质粒pRL-SV40共转染肝癌HepG2细胞并给予天然抑制剂大黄素,检测SREBP1转录活性的抑制效果.结果 SREBP1基因5′端上游2000 bp区域内有启动子特征序列,存在转录因子结合位点;重组质粒经酶切及测序鉴定证实为阳性克隆,瞬时转染肝癌HepG2细胞后经双荧光素酶报告基因系统检测,所克隆的片段序列具有启动子活性,该活性可被大黄素所抑制.结论 成功构建了pGL3-SREBP1-pro双荧光素酶报告基因表达载体,并证实其活性,可为进一步用于针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础.
关键词：固醇调节元件结合蛋白1转录启动子基因报告萤光素酶类大黄素蒽醌类生物信息学
分类号：R349.64(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81874356)湖北省卫计委重点项目(WJ2017Z023)探索基金(2018YHKT01)青年人才项目(ZY2019Q004)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 897-902 )
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