Survivin异常表达对前列腺癌转移及TGF-β/Smad通路的调节作用

徐子寒; 彭云; 董世强; 侯定坤; 王海涛

doi:10.11958/20201912

摘要：目的探讨生存素(Survivin)异常表达在前列腺癌(PCa)转移中的作用及机制.方法(1)通过TCGA数据库分析Survivin mRNA在正常前列腺组织和PCa组织中表达差异,分析有无淋巴结转移、Gleason分级以及预后信息.(2)采用免疫组化染色检测15例良性前列腺增生(BPH)活检标本和60例PCa活检标本中Survivin蛋白表达,比较患者不同临床特征间Survivin蛋白表达的差异.(3)常规培养人前列腺增生细胞系BPH和人PCa细胞系LNCaP、Du-145、PC-3,Western blot检测Survivin蛋白表达.利用LNCaP细胞构建Survivin稳定过表达组(Survivin-OE组)和相应对照组(Vector组),同时在PC-3细胞中构建Survivin稳定敲低组(Survivin-KD组)和相应对照组(NC组).CCK-8增殖实验与Transwell实验检测敲低和过表达Survivin后细胞增殖、侵袭能力的变化.Western blot检测2种细胞中Survivin、上皮间质转化(EMT)特征分子上皮细胞钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin),以及转化生长因子(TGF)-β/Smad通路相关蛋白TGF-β1、磷酸化Smad2/3(pSmad2/3)、Smad2/3、Smad4蛋白表达水平的改变.结果(1)TCGA数据库分析结果显示,Survivin在PCa组织中异常高表达,出现淋巴结转移的患者Survivin表达水平高于无淋巴结转移者(P<0.01);且随着Gleason分级的升高,Survivin表达水平越高(P<0.01);同时Survivin高表达的PCa患者的无进展生存时间明显短于Survivin低表达的患者(P<0.01).(2)免疫组织化学证实,PCa标本中Survivin蛋白高表达比例明显高于BPH组织(60.0％vs.26.7％,χ2=5.357,P<0.05).且临床分期T3+T4期、局部淋巴结转移和远处转移者Survivin高表达比例明显升高(P<0.05).(3)体外实验结果显示,LNCaP、Du-145、PC-3细胞中Survivin表达水平均高于BPH(P<0.05).LNCaP细胞过表达Survivin后,细胞增殖和侵袭能力增强,上皮标志物E-cadherin表达下降、间质标志物N-cadherin表达升高,同时TGF-β1、pSmad2/3和Smad4蛋白表达水平增加.而PC-3细胞敲低Survivin后,细胞增殖和侵袭能力减弱,上皮标志物E-cadherin表达增加、间质标志物N-cadherin表达降低,TGF-β1、pSmad2/3和Smad4蛋白表达水平降低.结论 Survivin在PCa中异常高表达,其可以通过调节TGF-β/Smad通路来促进肿瘤细胞EMT,进而提高PCa的转移与侵袭能力.