DOI: 10.11958/20202985
干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤
刘钰1
王朝阳2
李世朋3
胡莎莎1
杨爽2
蔡金贞4
张国梁4
1.天津医科大学研究生院 300070;天津医科大学一中心临床学院2.南开大学医学院3.焦作市人民医院4.天津医科大学一中心临床学院
摘要：目的 探讨小鼠肝脏缺血再灌注损伤(LIRI)过程中干扰素调节因子-1(IRF-1)对焦亡的影响.方法(1)24只C57BL/6正常雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组与缺血再灌注(IR)2 h、6 h和12 h组,每组6只.Sham组不进行IR处理,其他3组采用血管夹夹闭肝中叶、左叶脉管(门静脉、动脉与胆道)60 min后分别再灌注2、6、12 h建立LIRI模型.全自动生化仪检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)水平;HE染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学染色检测IRF-1表达情况;TUNEL染色检测肝脏细胞凋亡和焦亡情况;Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Cleaved-Caspase-1及gasdermin D(GSDMD)蛋白水平;透射电镜检测肝组织细胞形态变化.(2)将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和沉默IRF-1表达后进行模拟IR处理,分为过表达IRF-1+IR组、空载体+IR组、IRF-1 siRNA+IR组及其对照组(NC+IR组).Western blot检测4组细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD蛋白水平;透射电镜检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞焦亡情况;酶标仪检测细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量.结果(1)体内实验结果显示,与Sham组比较,IR6 h组和12 h组血清ALT、AST和IL-1β水平均有明显升高(P<0.05),IRF-1、Caspase-1和GSDMD蛋白表达升高(P<0.05);同时肝细胞出现肿胀、排列紊乱、空泡、片状坏死和红细胞淤积并伴有核膜损伤和线粒体肿胀.(2)体外AML12细胞过表达IRF-1后Cleaved-Caspase-1和GSDMD的表达增加,而敲低IRF-1表达后Caspase-1和GSDMD表达随之减少(P<0.05).沉默IRF-1表达后,与NC+IR组相比,IRF-1 siRNA+IR组细胞质膜和核膜的破坏减轻,细胞焦亡率下降,LDH释放量减少约20％(P<0.05).结论 IRF-1可通过调节Caspase-1和GSDMD的表达以及IL-1β的释放导致小鼠LIRI.
关键词：再灌注损伤肝干扰素调节因子1RNA小分子干扰细胞焦亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1白细胞介素1βgasdermin D
分类号：R329.447(人体形态学)R657.3(外科学各论)
资助基金：国家自然科学基金(81670600)
论文发表日期：2021-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 465-471 )
英文信息