DOI: 10.11958/20212205
lncRNA IGF2-AS调控IGF2对骨髓间充质干细胞心肌样分化的影响
钟晓鸣
刘洪洋
张蕾
姚新亮
鲁雪莉
许瑾瑾
程冠昌
河南大学淮河医院心血管内科 475000
摘要：目的 探讨长链非编码RNA胰岛素样生长因子2反义转录物(lncRNA IGF2-AS)调控胰岛素样生长因子2(IGF2)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)心肌样分化的影响.方法 分离培养SD大鼠的BMSCs,倒置显微镜观察原代细胞、第3代细胞的形态;流式细胞仪检测BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD45的表达.将第3代生长良好的BMSCs分为对照组、空载体组(转染pLVX-IRES-Zs Green1载体)、lncRNA IGF2-AS组(转染pLVX-IRES-Zs Green1-IGF2-AS)、5-氮杂胞嘧啶(5-AZA)组(8μmol/L 5-AZA处理)、si-NC组、si-IGF2-AS组、si-IGF2组、lncRNA IGF2-AS+si-NC组及lncRNA IGF2-AS+si-IGF2组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IGF2-AS表达;MTT法检测细胞活力;Western blot检测IGF2、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白表达;RNA下拉和RNA免疫沉淀(RIP)检测IGF2-AS与IGF2蛋白结合情况.结果 原代细胞在培养初期呈悬浮状态,大多数呈圆形,培养48 h后开始贴壁生长;第3代细胞呈长梭形,排列不整齐,相邻细胞间紧密连接,呈成纤维细胞样.第3代BMSCs高表达CD29(98.21％)、CD90(92.54％),低表达CD45(3.67％).过表达IGF2-AS或5-AZA处理均可促进BMSCs中Cx43、cTnT、cTnI蛋白表达,并降低细胞活力,且5-AZA组相应指标明显低于lncRNA IGF2-AS组(P<0.05).沉默IGF2-AS或抑制IGF2表达均可降低BMSCs中Cx43、cTnT、cTnI蛋白表达,并降低细胞活力(P<0.05);lncRNA IGF2-AS可靶向上调IGF2蛋白的表达(P<0.05);沉默IGF2逆转了过表达IGF2-AS对BMSCs心肌样分化的促进作用.结论 过表达IGF2-AS通过上调IGF2促进BMSCs心肌样分化.
关键词：RNA长链非编码小分子干扰胰岛素样生长因子Ⅱ间充质基质细胞肌细胞心脏细胞分化
分类号：R349.5(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81770296)
论文发表日期：2022-04-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 350-356 )
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