FUNDC1通过调控线粒体分裂影响高糖损伤H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

郑君毅; 张莹莹; 刘园园; 陈孟英; 郭绪昆

doi:10.11958/20220348

摘要：目的探讨含FUN14域蛋白1(FUNDC1)在高糖损伤的H9c2心肌细胞中通过调控线粒体分裂影响心肌细胞凋亡的作用机制.方法体外培养H9c2心肌细胞并建立高糖损伤模型,分别进行细胞转染,使用腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活剂5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷(AICAR)后,分为正常对照组(CTRL组)、高糖组(HG组)、HG+shRNA-NC组(转染shRNA-NC的HG组细胞)、HG+shRNA-FUNDC1组(转染shRNA-FUNDC1的HG组细胞)和HG+AICAR组(使用AICAR的HG组细胞).MTT法检测细胞存活率;酶标仪检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量;激光共聚焦显微镜观察线粒体结构;Western blot检测线粒体动力相关蛋白1(DRP1)、分裂蛋白1(FIS1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、活化的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、FUNDC1和GAPDH的蛋白表达水平.结果与CTRL组比较,HG组细胞存活率降低,LDH释放量升高,线粒体DRP1(DRP1-mito)、FIS1、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,胞浆DRP1(DRP1-cyto)和Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05).与HG组比较,HG+shRNA-FUNDC1组细胞存活率升高,LDH释放量明显降低,DRP1-mito、FIS1、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平降低,DRP1-cyto和Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05).HG+shRNA-NC组和HG组比较,各指标差异均无统计学意义(P>0.05).CTRL组线粒体主要呈线状结构,HG组和HG+shRNA-NC组线粒体均主要呈点状结构;与HG组比较,HG+shRNA-FUNDC1组线粒体线状结构增多,点状结构减少.与CTRL组比较,HG组FUNDC1蛋白表达水平升高(P<0.05).与HG组比较,HG+AICAR组FUNDC1蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 FUNDC1通过调控线粒体分裂影响高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,AMPK信号通路参与该过程.