DOI: 10.11958/20220960
m6A识别蛋白HuR调控lncRNA TRG-AS1抑制结直肠癌生长的机制研究
柴小兵
张利
褚菲菲
吴慧丽
郑州大学附属郑州中心医院消化内科 450000
摘要：目的 探讨N6-甲基腺苷(m6A)识别蛋白人类抗原R(HuR)调控长链非编码RNA T细胞受体γ位点反义RNA 1(lncRNA TRG-AS1)对结直肠癌(CRC)生长的影响.方法 比色法检测CRC患者的癌组织、癌旁组织及正常结肠上皮细胞NCM460及CRC细胞HCT116、SW480、LOVO中m6A含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测TRG-AS1表达;Western blot检测HuR蛋白表达.将HCT116细胞分为Ct组、OE-NC组、OE-HuR组、si-NC组、si-HuR组、si-HuR+pcDNA组、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1组,CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;裸鼠体内移植瘤实验观察肿瘤生长情况;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测TRG-AS1上是否存在m6A位点;RNA pull-down实验和RNA免疫共沉淀(RIP)检测TRG-AS1与HuR蛋白的相互作用.结果 在CRC组织和细胞中,HuR蛋白、TRG-AS1高表达,m6A含量降低,且在HCT116细胞中HuR蛋白、TRG-AS1表达最高,m6A含量最低(P<0.05),选择HCT116细胞为研究对象.与si-NC组比较,si-HuR组HuR蛋白、TRG-AS1表达降低,m6A含量升高(P<0.05);与OE-NC组比较,OE-HuR组HuR蛋白、TRG-AS1表达升高,m6A含量降低(P<0.05);与si-HuR组、si-HuR+pcDNA组比较,si-HuR+pcDNA-TRG-AS1组HuR蛋白、m6A含量变化差异无统计学意义,TRG-AS1表达升高(P<0.05);下调HuR可抑制HCT116细胞增殖、迁移、侵袭及体内移植瘤的生长,促进细胞凋亡,而上调HuR则呈相反趋势;过表达TRG-AS1减弱了沉默HuR对HCT116细胞增殖、划痕愈合率、侵袭、体内移植瘤生长的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;TRG-AS1上存在m6A位点,且TRG-AS1能与HuR蛋白相互作用.结论 沉默m6A识别蛋白HuR可通过抑制TRG-AS1表达进而抑制HCT116细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡.
关键词：结直肠肿瘤甲基化RNA长链非编码细胞增殖人类抗原RN6-甲基腺苷T细胞受体γ位点反义RNA 1
分类号：R735.3(消化系肿瘤)
资助基金：河南省医学科技攻关计划联合共建项目(LHGJ20210763)
论文发表日期：2023-02-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 124-131 )
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