DOI: 10.11958/20220920
转录因子EB在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究
盛思琪1
谢琳1
姜怡邓1
熊建团1
杨安宁1
吴凯1
杨勇2
杨晓明1
1.宁夏医科大学基础医学院 750004;宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室;宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验2.宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室;宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验;宁夏回族自治区人民医院
摘要：目的 探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制.方法 动物实验:将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组).细胞实验:(1)体外培养大鼠心肌细胞,采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧(Normoxia)组和缺氧/复氧(H/R)组.(2)在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEB腺病毒分为过表达对照(Ad-GFP)组、过表达对照+缺氧/复氧(Ad-GFP+H/R)组、过表达TFEB(Ad-TFEB)组、过表达TFEB+缺氧/复氧(Ad-TFEB+H/R)组、干扰对照(sh-NC)组、干扰对照+缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰TFEB(sh-TFEB)组、干扰TFEB+缺氧/复氧(sh-TFEB+H/R)组.(3)分别用DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组.(4)在衰老心肌细胞中转染干扰DNMT3b腺病毒分为干扰对照(sh-NC)组、干扰对照缺氧/复氧(sh-NC+H/R)组、干扰DNMT3b(sh-DNMT3b)组、干扰DNMT3b缺氧/复氧(sh-DNMT3b+H/R)组.实时荧光定量PCR(qPCR)检测TFEB的mRNA表达水平;Western blot检测衰老心肌细胞中自噬相关蛋白TFEB、LC3B和p62的蛋白表达;巢式甲基化特异性PCR(nMS?PCR)检测TFEB启动子区的DNA甲基化水平.结果 与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEB的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01);过表达TFEB后,与Ad-GFP组比较,Ad-TFEB组LC3B-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平降低,p62的蛋白表达水平升高(P<0.01),而干扰TFEB后得到相反的结果(P<0.01).与Sham组或Normoxia组比较,I/R组和H/R组中TFEB启动子区DNA甲基化水平升高(P<0.05).与H/R组比较,NA组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01);干扰DNMT3b后,与sh-NC组比较,sh-DNMT3b组TFEB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01).结论 DNMT3b通过调控TFEB启动子区DNA甲基化抑制TFEB的表达,进而促进衰老心肌细胞自噬.
关键词：肌细胞心脏细胞衰老转录因子EB细胞自噬DNA甲基化DNMT3b
分类号：R542.2(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：国家自然科学基金(82160049)国家自然科学基金(81860044)宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(2020BFH02003)宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(2021BEG02033)宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(2021BEG02028)
论文发表日期：2023-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 246-252 )
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