DOI: 10.11958/20221070
hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究
赵元元
吴小华
石家庄市第四医院(河北医科大学附属妇产医院)生殖中心,河北省母胎医学重点实验室,石家庄市生殖健康与不孕不育研究所 050011
摘要：目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-1260a靶向CASP8对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞凋亡的影响.方法 取健康足月胎儿的脐带进行组织块贴壁法分离培养获得hUC-MSCs,采用流式细胞仪检测其标志性蛋白CD73和CD90的表达.收集hUC-MSCs培养上清液,提取hUC-MSCs外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体膜表面标志物热休克蛋白70(HSP70)和肿瘤易感基因101(TSG101)的表达.PKH67标记外泌体,采用激光共聚焦显微镜观察PCOS颗粒细胞对外泌体的内化作用.Western blot检测hUC-MSCs外泌体对PCOS颗粒细胞凋亡的影响.利用GSE69909临床样本进行生物信息学分析,得到hUC-MSCs外泌体中异常高表达的miRNAs,并通过实时荧光定量PCR进行验证.合成miR-1260a模拟物及其对照转染至KGN细胞中,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率.利用Target Scan Human 7.2数据库进行miR-1260a靶基因的预测,采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-1260a对靶基因的调控作用.qPCR检测PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体前后miR-1260a及CASP8的表达情况.结果 经鉴定所培养的细胞符合hUC-MSCs的特征,hUC-MSCs外泌体为直径30～150 nm的圆形或椭圆形囊泡状结构,表达标志物蛋白HSP70和TSG101,并且可被PCOS颗粒细胞摄取.与对照组相比,hUC-MSCs上清液处理组及hUC-MSCs外泌体处理组Cleaved-Caspase-8、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达显著下调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著上调(P＜0.05).经GSE69909数据库筛选及qPCR验证发现miR-1260a在hUC-MSCs外泌体中富集,miR-1260a过表达可显著抑制颗粒细胞的凋亡(P＜0.05),经验证miR-1260a可直接靶向CASP8且PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体后,颗粒细胞中miR-1260a的表达升高,CASP8的表达降低(P＜0.05).结论 hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a通过靶向CASP8抑制PCOS颗粒细胞凋亡.
关键词：多囊卵巢综合征脐带间质干细胞外泌体粒层细胞细胞凋亡微RNAsmiR-1260a
分类号：R711.75(妇科学)
资助基金：河北省自然科学基金面上资助项目(H2019106051)河北省自然科学基金青年资助项目(H2022106020)石家庄市科学技术研究与发展计划项目(211460513)
论文发表日期：2023-04-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 337-343 )
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