DOI: 10.11958/20221305
人骨髓间充质干细胞来源外泌体分离、鉴定及卵巢摄取
杨雨涛
王袁
谢嘉欣
付霞霏
南方医科大学珠江医院妇产医学中心 510282
摘要：目的 提取及鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC)来源外泌体,探讨颗粒细胞及自身免疫性早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢摄取外泌体的情况.方法 取P3至P9代hBMSC培养上清液,倒置显微镜下观察P4代hBMSC细胞形态,超高速离心法提取外泌体;纳米流式仪测外泌体粒径;透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9、肿瘤易感基因(TSG)101表达.外泌体采用DiR进行荧光标记;共聚焦显微镜观察人卵巢颗粒细胞(KGN)共孵育24 h和48 h摄取外泌体的情况;用ZP3蛋白多肽构建自身免疫性POI小鼠模型,在建模成功后的第1、7天腹腔注射150μg DiR标记的外泌体.在第2次注射外泌体后的第14天通过活体成像仪监测小鼠卵巢摄取情况.结果 hBMSC呈纺锤状,大小均一,提取出的外泌体平均直径为(81.12±17.23)nm.透射电镜显示外泌体结构为双层膜状;外泌体表面相关特异性蛋白CD63、CD9和TSG101呈阳性.共聚焦显微镜下观察到KGN细胞能够摄取外泌体,并与共孵育24 h比,48 h摄取的外泌体量更多.在自身免疫性POI小鼠模型中观察到小鼠卵巢部位有发光信号.结论 本研究成功提取出hBMSC来源外泌体,并观察到KGN细胞及自身免疫性POI小鼠卵巢组织摄取外泌体.
关键词：间质干细胞外泌体自身免疫超速离心法早发性卵巢功能不全颗粒细胞
分类号：R711.75(妇科学)
资助基金：国家自然科学基金(82271657)广东省自然科学基金资助项目(2021A1515010701)
论文发表日期：2023-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 468-472 )
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