Naa20通过抑制AIM2表达减轻脓毒症心肌损伤

刘畅; 范彩红; 刘佳; 刘亚珊; 张诗琪; 刘士铭; 申艳娜

doi:10.11958/20230338

摘要：目的探究Naa20在脂多糖(LPS)脓毒症心肌损伤中的调控作用及机制.方法 12只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和模型组,每组6只.模型组采用LPS一次性尾静脉注射方法造模,对照组注射同等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS).LPS注射12h后采用心脏多普勒超声检测各组小鼠心脏功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)表达水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠心肌损伤程度.在体外分离、培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为对照组和LPS处理组.荧光探针检测心肌细胞中线粒体膜电位和活性氧(ROS)释放情况;Western blot检测心肌细胞中黑色素瘤缺失因子2(AIM2)、消皮素D(GSDMD)、活化的GSDMD(GSDMD-N)、白细胞介素(IL)-1β、活化的IL-1β(p17)和Naa20的蛋白表达水平;ELISA检测心肌细胞上清液中IL-1β含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测心肌细胞中Naa20的表达.H9c2心肌细胞分为对照组、Naa20对照组、LPS组和Naa20+LPS组,四甲基偶氮唑盐(MTT)和乳酸脱氢酶(LDH)实验检测心肌细胞活力;免疫共沉淀检测Naa20与AIM2的结合情况.结果与对照组相比,模型组小鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)降低,血清中CK-MB含量增加(P＜0.01),小鼠心肌出现病理改变.体外实验结果表明,与对照组相比,LPS处理组心肌细胞线粒体膜电位降低,ROS释放增多,AIM2、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β、p17和Naa20的蛋白表达水平增加,上清液中IL-1β含量增多(P＜0.05).免疫共沉淀证实Naa20与AIM2结合.与LPS组相比,Naa20+LPS组心肌细胞活力增强,AIM2乙酰化修饰增多,AIM2、GSDMD和GSDMD-N的蛋白表达水平降低,上清液中IL-1β含量降低(P＜0.05).结论 Naa20可通过调节AIM2蛋白表达调控心肌细胞焦亡,减轻心肌损伤.