DOI: 10.11958/20231036
Ca2+诱导HK-2细胞焦亡及黏附性变化对含钙肾结石形成的分子机制研究
向近杰
吕懋鑫
王梦悦
张坤
李颢
昆明医科大学第一附属医院泌尿外科(邮编 650032)
摘要：目的 探究人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)经Ca2+作用后的焦亡经典通路激活及黏附性变化对含钙肾结石形成的作用及机制.方法 不同质量浓度的CaCl2(0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 g/L)培养HK-2细胞24 h,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞凋亡术检测筛选最佳处理浓度.使用透射电镜观察高钙环境下肾小管上皮细胞微结构的变化.在高钙处理后用2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的产生,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法分别检测高钙刺激后HK-2细胞焦亡相关NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、gasderminD(GSDMD)和黏附分子骨桥蛋白(OPN)、CD44的mRNA和蛋白表达水平变化,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)-1β、IL-18和黏附分子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在高钙刺激后的表达变化.结果 Ca2+对HK-2细胞生长具有细胞毒性并且可以促进其凋亡,Ca2+浓度越高,对HK-2细胞生长的毒性越大且凋亡率越高.高钙可以促进HK-2细胞发生细胞膜完整性缺失、内容物释放及胞内大量空泡产生等焦亡样形态学改变.与对照组相比,1.0 g/L及2.0 g/L CaCl2 组的ROS表达水平依次升高,焦亡相关基因NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18以及黏附相关基因OPN、CD44、MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均依次升高(P＜0.05).结论 高钙能使HK-2细胞发生氧化应激损伤并产生ROS,从而激活NLRP3炎症小体,进而导致细胞焦亡经典通路的激活和细胞黏附性的增加,最终间接促进肾结石的形成.
关键词：细胞焦亡高钙尿症活性氧细胞黏附分子肾结石
分类号：R349.5(基础医学)R692.4(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：云南省科技厅科技计划项目(202001AY070001-158)
论文发表日期：2024-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 250-255 )
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