DOI: 10.11958/20231028
TFAP2A对肾小球硬化相关基因ADCK4转录调控机制的研究
张小田
任献国
南京医科大学附属逸夫医院儿科(邮编 211112)
摘要：目的 探索细胞中TFAP2A对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)相关基因含aarF结构域的激酶4(ADCK4)的转录调控机制及TFAP2A与ADCK4是否存在特定的结合区域.方法 生物信息学分析肾小球硬化基因火山图,ADCK4及TFAP2A表达水平的关系.JASPAR数据库预测ADCK4基因转录起始位点-464 bp/+206 bp区域包含TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A siRNA浓度分别为5、10、15 µmol/L,TFAP2A过表达质粒质量浓度分别为50、100、300 µg/L,通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对ADCK4基因启动子水平的调控作用.TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒转染细胞,实时荧光定量PCR检测TFAP2A、ADCK4 mRNA表达,蛋白免疫印迹实验检测TFAP2A、ADCK4蛋白表达.染色质免疫沉淀试验验证TFAP2A与ADCK4启动子的特定区域结合.结果 生物信息学分析显示FSGS肾组织中RNA-Seq RNA表达上调的基因273个,表达下调的基因219个;ADCK4与TFAP2A表达水平呈正相关(P＜0.01).双萤光素酶报告基因实验证明TFAP2A siRNA浓度为10、15 µmol/L的ADCK4启动子相对萤光素酶活性增强,TFAP2A过表达质粒质量浓度为100、300 µg/L的ADCK4启动子萤光素酶活性降低(P＜0.05).与对照组相比,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平升高;过表达实验中,与对照组比较,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05).染色质免疫沉淀试验发现TFAP2A能与ADCK4启动子的特定区域结合.结论 转录因子TFAP2A负向调控ADCK4基因表达,增加了调控足细胞重要基因的转录因子成员.
关键词：肾小球硬化症局灶节段性转录因子AP-2启动区遗传转录调控含aarF结构域的激酶4
分类号：R726.92(小儿外科学)
资助基金：江苏省自然科学基金(M2020022)
论文发表日期：2024-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 449-453 )
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