山萘酚逆转肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的作用机制研究

梁大敏; 杨正久; 张子萍; 钱静; 毛朝坤

doi:10.11958/20231828

摘要：目的探讨山萘酚(KAE)对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu功能的影响.方法采用KAE处理Bel-7402/5-Fu细胞,将细胞分为对照组和药物组(0.064、0.320、1.600、8、40、200 µmol/L KAE);根据干扰DNA依赖性激酶催化亚基(DNA-PKcs)、加入蛋白酶体抑制剂MG132或加入自噬抑制剂CQ,将细胞分为si-NC组和DNA-PKcs干扰(siRNA-1664、siRNA-2142、siRNA-3785)组,对照组、KAE组和KAE+si-DNA-PKcs组,对照组、KAE+DMSO组、KAE+MG132组和KAE+CQ组.采用CCK-8检测细胞增殖,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测组蛋白H2AX磷酸化(γ-H2AX)、DNA-PKcs、DNA双链断裂修复/V(D)J重组蛋白(Artemis)和药泵基因(P-gp)mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白稳定性实验检测DNA-PKcs蛋白稳定性,免疫共沉淀检测DNA-PKcs蛋白泛素化.结果与对照组相比,8 µmol/L KAE处理细胞24 h可抑制约50%的细胞增殖能力,选择此时间和浓度进行后续研究.与对照组相比,KAE组γ-H2AX mRNA和蛋白表达水平升高,DNA-PKcs、Artemis和P-gp mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05);与对照组相比,KAE促进Bel-7402/5-Fu细胞周期阻滞于G2/M期,增加细胞凋亡;与si-NC组相比,siRNA-1664能显著下调DNA-PKcs mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05);与KAE组相比,KAE+si-DNA-PKcs组进一步促进了KAE对细胞的效应;与对照组相比,KAE+DMSO组DNA-PKcs蛋白表达水平降低(P＜0.05);与KAE+DMSO组相比,KAE+MG132组DNA-PKcs蛋白表达水平升高(P＜0.05),而KAE+CQ组DNA-PKcs蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05);与对照组相比,KAE+DMSO组促进DNA-PKcs蛋白的泛素化,而KAE+MG132组则可抑制其泛素化(P＜0.05).结论 KAE能够诱导肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞凋亡和细胞周期阻滞.