体外分离、纯化人表皮干细胞促进皮肤的功能生理性修复
李剑1
戴育成2
1.江西医学院2.江西医学院第二附属医院血液科,江西省南昌市,330006
摘要：目的表皮干细胞是皮肤发生、修复、重建的关键"种子细胞",因而研究建立人表皮干细胞体外分离、培养及鉴定的方法非常重要.方法通过酶消化法,分离小儿包皮的表皮与真皮层,表皮制成单细胞悬液,以高糖低钙的 DMEM培养基,补充 100 ml/L的干细胞培养专用胎牛血清( FBS), 0.05 mmol/L 氯化钙, 10 ng/ml表皮生长因子, 1× 10- 6 mol/L氢化可的松进行培养.在实验之前用胶原 IV包被直径 35 mm的培养皿,其中有些放置消毒盖玻片以制"细胞玻片 ",置 4 ℃冰箱中放置 30 min以上,吸干胶原 IV,再将培养皿置室温下自然干燥半小时以上,备用.调整细胞含量为 2× 106/ml ,接种于包被好胶原 IV的培养皿中快速黏附 10～ 15 min( 37 ℃),弃去未黏附细胞,保留快速黏附细胞继续培养.培养至 21 d对所培养细胞进行流式细胞仪α 6 、CD71表型鉴定,角蛋白 19( K19)、角蛋白 5( K5)免疫细胞化学染色鉴定以及形态学观察、克隆计数.结果在胶原 IV包被的培养皿中快速贴壁细胞经继续培养,可见细胞克隆数增多,细胞传代次数达 8～ 10次,培养时间达 2个月.K19, K5免疫化学染色阳性,α 6 briCD71dim 细胞占细胞总数的 40%左右.结论研究表明用胶原 IV快速黏附法可从包皮分离和富集表皮干细胞,用此体外培养体系,可较好地扩增表皮干细胞.
关键词：干细胞细胞培养细胞分离实验室技术和方法
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：江西省科技厅重大招标项目(E021101)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1620-1621 )
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