绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究
姜晓丹
徐如祥
张旺明
邹雨汐
蔡颖谦
杜谋选
1.解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,5102822.解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,5102823.解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,5102824.解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,5102825.解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,5102826.解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,510282
摘要：目的:探讨重组腺相关病毒包装绿荧光蛋白(rAAV-GFP)标记人骨髓源性神经干细胞(BM.NSCs)的可行性,为进一步行标记细胞移植实验研究奠定基础. 方法:以成人自愿者的骨髓为研究对象,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞并用" Cytokine@神经干细胞培养基"诱导分化为神经干细胞,分化的细胞以免疫细胞化学鉴定.对接种生长的 BM.NSCs(1×105～6/mL)以无血清培养基冲洗并重悬细胞,依最佳病毒感染指数(MOI)为 105的标准计算、加入包装了 GFP的 rAAV病毒颗粒,连续培养 12 h(37℃,50 mL/L CO2)以感染细胞;补加100 g/L胎牛血清后,于神经干细胞培养基中继续细胞培养24 h(37℃,50 mL/L CO2)以上,荧光显微镜(Olympus IX70, Japan)追踪观察 rAAV GFP标记的 BM.NSCs. 结果:BM.NSCs于标记后 1周内见不到GFP阳性表达 ; 在标记10 d后才出现有GFP阳性表达情况 (平均每个200倍镜下视野可见到 5～10个GFP阳性细胞),所标记的细胞在荧光显微镜下呈亮绿色;随着培养时间延长,BM.NSCs表达GFP也逐渐增强、阳性细胞数量逐渐增多,并可于 1个月时最明显(标有 GFP阳性的细胞可达 BM.NSCs总数的60%),追踪观察到到2.5个月时亦未见衰减. 结论:rAAV GFP在人骨髓源性神经干细胞中的表达较迟,但呈渐强趋势; rAAV GFP标记人骨髓源性神经干细胞具有可行性.
关键词：干细胞神经系统/细胞学骨髓细胞培养荧光抗体技术
分类号：R741(神经病学)
资助基金：国家自然科学基金(3027049)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3439-3441 )
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