绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达
闫乃红1
陈清英1
曹桂群1
卢亦路1
张发强1
袁琼兰2
夏庆杰1
1.四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,6100412.泸州医学院人体解剖学教研室,四川省泸州市,646000
摘要：目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值.方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行.以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack CMV中,与骨架质粒pAdEasy 1同源重组为腺病毒载体.线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达.结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653 bp个核苷酸,同源性比较该序列正确.②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL.③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经于细胞扩增出653 bp的带.结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达.
关键词：神经系统干细胞脑源性神经营养因子病毒
分类号：R329.2(人体形态学)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 26-28 )
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