兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律
张龙芳
崔鹏程
陈文弦
刘智
李贵泽
孙永柱
1.解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省,西安市,7100382.解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省,西安市,7100383.解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省,西安市,7100384.解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省,西安市,7100385.解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省,西安市,7100386.解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省,西安市,710038
摘要：目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律.方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成. ①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham'sF12为1:1,并加入以下激素及生长因子:10 mg/L胰岛素、5 mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4 mg/L氢化可的松、7.5 mg/L内皮细胞生长支持物、25 μg/L表皮生长因子、1 mmol//L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50 mg/L链霉素)体外培养. ②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞.扫描电镜观察细胞表面结构.结果: ①气管上皮细胞的分离:酶低温消化加刷洗法获得的气管上皮细胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转. ②气管上皮细胞生长状态和形态特征:套皿接种细胞24 h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂相.五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200～400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡. ③纤毛细胞的电镜观察:可见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出. ④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91±3)%.结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,可以建立兔气管纤毛上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值.
关键词：细胞培养纤毛上皮细胞兔
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：中国科学院资助项目(3Q171007)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 34-36 )
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