化学合成siRNA对原代皮层神经元NgR表达的抑制效应
沈剑虹
包映晖
罗其中
江基尧
1.上海第二医科大学附属仁济医院神经外科,上海市,2000012.上海第二医科大学附属仁济医院神经外科,上海市,2000013.上海第二医科大学附属仁济医院神经外科,上海市,2000014.上海第二医科大学附属仁济医院神经外科,上海市,200001
摘要：目的:了解化学合成siRNA对原代培养神经元NgR表达的抑制效果和对细胞的毒性作用.方法:实验于2005-03/07在上海市消化疾病研究所进行.①取怀孕16 d的SD大鼠3只进行大鼠原代皮层神经元培养.②化学合成一段针对大鼠NgR基因编码区的siRNA,用阳离子脂质体转染大鼠皮层神经元.③分别于转染前、转染后24,48,72,96 h行反转录-聚合酶链反应检测NgR mRNA水平;转染后48 h行免疫细胞化学检测NgR表达的变化;碘化丙啶染色检测转染后各时间点神经细胞的存活情况.结果:①转染siRNA后24h和48 h NgR mRNA水平明显下降,到72 h明显回升,转染后96 h NgR mRNA水平与转染前已无显著差异.②与转染无关序列oligo的细胞相比,转染siRNA的细胞其NgR表达明显下降.③碘化丙啶染色显示转染后24和48 h,用脂质体转染的细胞(包括转染siRNA、无关序列Oligo和单纯脂质体组)其碘化丙啶阳性率与非转染对照组无明显差异,而转染后72和96 h碘化丙啶阳性率显著高于未转染组[siRNA组为(12.57±0.69)%和(13.60±0.61)%;无关序列组为(12.64±0.47)%和(13.61±0.37)%;脂质体组为(12.59±0.29)%和(14.08±0.31)%;未转染组为(8.41±0.16)%和(8.40±0.71)%;P＜0.05]但在各时间点,脂质体转染的各组间碘化丙啶阳性率不存在明显差异.结论:化学合成siRNA能有效抑制原代皮层神经元的NgR表达,并于短期内维持于低水平.该段siRNA转染的毒性作用主要来自于转染试剂,与序列本身无明确关系.
关键词：神经元RNA大脑皮质细胞培养
分类号：R338.1(人体生理学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30371456)上海市科委项目(034119822)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 22-24 )
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