单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别
耿东进
陈军浩
陈蕾蕾
张乐
刘勇
周锦勇
顾香芳
韩鹂
1.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100082.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100083.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100084.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100085.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100086.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100087.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,2100088.南京大学医学院附属鼓楼医院分子医学研究中心,医学检验中心,南京市,210008
摘要：目的:利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法,实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子,以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法.方法:实验于2001-10/2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成.①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验.②胰岛活性测定实验中,选择1×106分化的胰腺干细胞,用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4 h,检测12,14,24 d培养液中胰岛素的浓度.③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中,选择12个单个胰腺干细胞进行检测,另取12个单个未分化的干细胞作为对照.聚合链式反应体系为20μL.聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4 min,94℃变性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸2 min条件下循环35次.聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳.结果:①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测:培养12,14,24 d时培养液中胰岛素的浓度分别为42.6,68.2,73.5 IU/L,随着时间的延长,呈逐渐升高的趋势.②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果:12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性,而作为对照的12个未分化干细胞均未检出,两者差异显著(P＜0.001).结论:采用单细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障,证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法.
关键词：干细胞/细胞学聚合酶链反应细胞分化细胞分离胰岛素基因细胞培养的胰腺/细胞学免疫组织化学
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 50-52 )
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