胰酶消化后新生鼠成肌细胞生长方式与规律以及模拟转基因电穿刺激对冻存和复苏细胞的损害
王炜1
石明2
唐孝达3
王佳2
1.东莞市人民医院泌尿外科,广东省东莞市,5230182.四川大学华西医院泌尿科,四川省成都市,6100413.上海市第一人民医院泌尿科,上海市,200085
摘要：目的:采用原代培养技术进行大鼠原代细胞的培养与增殖,并模拟基因转染中的电穿刺激,探讨大鼠成肌细胞在基因转染技术中可能的应用前景.方法:实验于2000-04/10在四川大学华西医院病理实验室完成.①选取SD新生鼠10只,消毒后切开皮肤,分离大腿肌肉,高浓度磷酸盐缓冲液浸泡,5 min后剪碎组织块至1 mm3以下,加入胰酶使用液,37℃水浴消化,胎牛血清终止消化过程,弃上清.再加入生长培养基重悬细胞,置于CO2孵箱中进行接种.②弃去培养基,重新加入等量生长培养基,3～5 d更换1次.显微镜下细胞若出现间隙或变圆即中止消化.细胞计数后按所需密度接种于培养瓶,1:2或1:3传代.③细胞的冻存与复苏:冻存液的配制比为二甲基亚砜:胎牛血清:Dulbecco改良的Eagle培养基=1:4:5.消化细胞后离心去上清,将沉淀细胞移至冻存管内,加入冻存液,-80℃过夜,第2天取出后先行液氮保存,后迅速投入37℃水浴中振荡,使其1 min内完全溶解.收获进入对数生长期的细胞,15×106个/次,加入一次性电转杯内.电压0.3 KV,电场强度0.5 KV/cm,电容950μF,电阻250Ω条件下电击24ms.结果:①胰酶消化后新生鼠成肌细胞的生长方式:成肌细胞呈圆形,悬浮于培养液中,大约两三天开始贴壁生长,五六天后细胞几乎全部贴壁.②新生鼠成肌细胞的生长规律:胰酶消化五六天后,成肌细胞进入对数生长期,增殖明显加快,细胞间隙变窄,呈极性生长现象,数量可达1×106个/mL.传代培养可至20代以上,生长速度明显减缓.③模拟转基因电穿孔条件下对冻存和复苏细胞的损害:电穿孔后出现大量细胞碎片,约有一半左右细胞在一两天内死亡,10～14 d后残留细胞开始增殖,贴壁生长.结论:以原代培养技术培养、冻存成肌细胞并模拟电穿孔刺激,大鼠成肌细胞的培养效率高、细胞胞膜稳定且存活周期长,提示成肌细胞是一种较理想的基因转染包装细胞.
关键词：细胞培养的大鼠
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：2( 46-47 )
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