大鼠胚胎脑源性神经干细胞的分离培养和鉴定
唐巍1
王键2
胡建鹏3
陈业农4
韩小祥4
程红4
俞丽华4
1.安徽中医学院,针灸骨伤临床学院康复教研室,安徽省,合肥市,2300382.安徽中医学院,中医临床学院中医基础理论教研室,安徽省,合肥市,2300383.安徽中医学院,中西医结合临床学院病理教研室,安徽省,合肥市,2300384.安徽中医学院,中医临床学院,安徽省,合肥市,230038
摘要：目的:分离培养大鼠胚胎脑源性神经干细胞,并进行增殖分化鉴定.方法:实验于2005-06/12在中国科学技术大学生命科学学院周江宁研究室进行.①自孕14 d Wistar大鼠胚胎分离大脑皮质及皮质下组织,经机械吹打分离成单细胞后,利用无血清原代及传代培养方法,在添加重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子和B27添加剂的DMEM/F12(1:1)培养基中进行悬浮培养,获得具有克隆能力的细胞群;用有限稀释法,得到来源于同一细胞的亚细胞系克隆.②从培养基中撤除生长因子和B27添加剂,换成含体积分数为0.1的胎牛血清的DMEM/F12培养基,将培养的细胞球接种于预先铺有多聚赖氨酸盖玻片的培养皿,诱导分化.③以免疫荧光细胞化学技术,用神经干细胞的特异性单克隆抗体(巢蛋白)和增殖细胞单克隆抗体(5-溴脱氧尿苷嘧啶)鉴定克隆细胞,以鉴定神经干细胞的自我更新增殖能力.④以免疫荧光细胞化学技术,用神经细胞的特异性抗体(神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂)鉴定分化细胞,以鉴定神经干细胞的多向分化潜能.结果:①从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并具有增殖的能力,表达神经上皮干细胞蛋白抗原和增殖细胞抗原.②在血清诱导下,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞3种神经细胞的特异性抗原.结论:运用上述方法分离培养的细胞具有自我更新和增殖能力,并具有多向分化潜能和具有神经干细胞的特异性抗原.
关键词：神经干细胞增殖分化细胞培养
分类号：R743(神经病学与精神病学)
资助基金：安徽省自然科学基金(050430904)安徽省教育厅自然科学研究项目(2006KJ382B)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 36-38,插图11-1 )
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