体外培养诱导成人骨骼肌干细胞向神经样细胞分化的实验
张振兴1
汪璇2
刘淑红2
吴海涛2
窦万臣1
栗世方1
孔燕国1
魏宇魁1
赵飞帆1
范明2
王任直1
1.中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科,北京市,1007302.解放军军事医学科学院基础医学研究所,北京市,100850
摘要：目的:以含有碱性成纤维细胞生长因子和二甲基亚砜的培养液对原代培养的成人骨骼肌干细胞进行诱导,探讨其转化为神经细胞的可行性.方法:实验于2004-06/12在军事医学科学院基础医学研究所完成.实验所用3例成人正常颞肌标本取自于开颅手术患者,由北京协和医院神经外科提供,患者知情同意.机械分离加混合消化液处理分离单细胞,体外培养及克隆纯化,培养至第3代时加入含有碱性成纤维细胞生长因子二甲基亚砜的培养液诱导分化,进行反转录-聚合酶链反应分析和免疫荧光细胞化学染色,观察诱导后细胞形态变化,同时结合普通光线在100倍下随机计数6个视野(大于100个细胞),计算阳性细胞的百分比.结果:①骨骼肌干细胞培养24 h后见少量细胞贴壁呈短的梭形或棒状.培养第3天红细胞开始裂解成细胞碎屑并聚集、悬浮在培养基中,这些碎屑随着换液而逐渐消失.克隆培养的细胞大约于接种后两三周才能铺满孔底,胞体呈梭形,排列规整.②荧光显微镜下胞核蓝染,每个细胞都呈Desmin染色阳性,证明成人骨骼肌干细胞能够在体外进行克隆培养.③在含有碱性成纤维细胞生长因子和二甲基亚砜的培养液诱导下,骨骼肌干细胞可分化为形态上类似于神经元和星形胶质细胞的细胞.④反转录-聚合酶链反应分析证实诱导后的骨骼肌干细胞有神经丝蛋白和胶质纤维酸性蛋白基因表达.⑤免疫荧光细胞化学检测到诱导后的骨骼肌干细胞呈神经丝蛋白和胶质纤维酸性蛋白免疫反应阳性.⑥诱导后骨骼肌干细胞分化为神经丝蛋白阳性细胞的比例为(35.9±6.3)%,分化为胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的比例为(43.7±5.3)%.结论:成人骨骼肌干细胞在体外经诱导分化后形态类似于神经元和星形胶质细胞,并且表达神经元标志物神经丝蛋白、星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白,认为成人骨骼肌干细胞在体外可诱导分化为神经元和星形胶质细胞.
关键词：干细胞肌骨骼二甲亚砜神经元
分类号：R3(基础医学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30470833)国家重点基础研究发展计划（973计划）(No2002CCA04400)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 4-6,插1 )
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