几种骨髓间充质干细胞体外培养特性的比较
夏冰
王捷
郭立达
詹纯列
肖育华
杨传红
1.解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东省,广州市,5100102.解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东省,广州市,5100103.解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东省,广州市,5100104.解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东省,广州市,5100105.解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东省,广州市,5100106.解放军广州军区广州总医院医学实验科,广东省,广州市,510010
摘要：背景:骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMSC)可分化成多种非造血细胞系及寻踪损伤组织并进行修复,BMSC潜在的临床应用已被广泛研究,其生物学特性有待进一步探讨.目的:观察体外培养条件下几种不同种属骨髓间充质干细胞生物学特性.设计:随机对照观察.单位:解放军广州军区广州总医院医学实验科.材料:实验于2004-06/2005-07在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成.选择30只体质量为(16.0±2.0)g,出生35～40 d的昆明小鼠;30只体质量为(160±20)g,出生约40 d的SD大鼠;8只体质量(2.0±0.2)kg,出生80～90 d的新西兰白兔.所有动物为清洁级,购自南方医科大学动物中心;10名健康志愿者的骨髓,所有健康志愿者年龄25～32岁,男女各半.方法:采用Caplan实验室建立的方法制备小鼠和大鼠BMSC,通过髂骨穿刺取得骨髓液分离兔和人的BMSC.光镜和电镜观察各种属BMSC形态,MTT法测各种属BMSC定生长曲线,免疫荧光细胞化学法和流式细胞仪分析各种属BMSC表面分子Stro-1的表达,并通过试剂盒检测碱性磷酸酶(AKP)活性、免疫组化检测骨钙素表达以及Von Kossa法显示钙盐沉积等手段评价BMSC对成骨诱导液(10 nmol/L地塞米松,10 mmol/L磷酸甘油和50mg/L抗坏血酸)反应性.成脂分化程度以含Oil Red-O-染色油滴的细胞百分数评估.主要观察指标:①各种属BMSC的生长形态和生长曲线.②各种属BMSC标志物Stro-1的表达.③对成骨诱导液的反应.结果:①光镜下观察的各种属BMSC生长形态明显不同,在成熟或老化阶段,小鼠细胞变扁平,呈不规则多角形,破碎时成点状沉积在瓶底;大鼠、家兔和人的细胞老化后体积明显增大,呈多边形,胞浆中出现空泡,呈棉絮状漂起、自瓶壁脱落.各种属BMSC多层重叠生长方式相同,均无接触抑制并分别含有两群细胞(一群可从单细胞长成克隆,迅速扩增;另一群零星散在分布,不进行增殖).电镜显示所有原代细胞均有微绒毛,根据超微结构可分为2个亚群:一群细胞富有细胞器,以常染色体为主;另一群细胞器少,且以异染色体为主.各种属BMSC生长曲线基本一致.②人原代贴壁细胞BMSC标志物Stro-1的阳性率为(91.4±8.3)%,小鼠为(83.5±6.2)%.③在成骨诱导液中,小鼠BMSC向脂肪细胞分化,家兔细胞死亡,大鼠和人细胞可被成功诱导为成骨细胞.BMSC在培养中有自发分化现象.结论:小鼠、大鼠、家兔和人BMSC可在体外被大量扩增,得到以低/未分化细胞为主的、不同分化程度细胞的混合物;不同种属BMSC在形态学和对同一诱导液的反应性上存在差异.
关键词：骨髓间充质干细胞生物学特性细胞培养
分类号：R3(基础医学)
资助基金：广东省自然科学基金(20023001)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 138-140,插图37-6 )
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