新生小鼠脊髓神经干细胞体外增殖及其多潜能分化特性
祖波
尹宗生
张辉
1.安徽医科大学第一附属医院骨科,安徽省合肥市,2300222.安徽医科大学第一附属医院骨科,安徽省合肥市,2300223.安徽医科大学第一附属医院骨科,安徽省合肥市,230022
摘要：目的:观察新生小鼠脊髓神经干细胞的体外增殖及其分化特性.方法:实验于2005-11/2006-02在安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室完成.①在无菌条件下,利用显微解剖分离新生小鼠(出生后2 d内)脊髓,采用原代机械吹打使其成为单细胞悬液,离心,弃去上清液,加入干细胞培养液(含20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,20 μg/L表皮生长因子,B27辅助培养液),以1×108 L-1密度接种于25 mL培养瓶中,进行原代培养.②将原代培养7 d左右的细胞再次离心,弃去上清,加入干细胞培养液,机械吹打成单细胞悬液,以5×107 L-1密度进行传代培养,每六七天传代1次.③机械吹打制成的单细胞悬液,经过传代培养,重新增殖为神经球,采用巢蛋白抗体鉴定培养细胞,用体积分数为0.1的胎牛血清诱导神经干细胞分化后,用神经元和星型胶质细胞标志物微管相关蛋白,胶质纤维酸性蛋白相应抗体检测神经干细胞分化情况.结果:①脊髓源性神经干细胞形态学观察:在细胞培养第3,4天即可见培养基中出现由几个或十几个细胞组成的结构紧密、大小不等的悬浮细胞团块,称之为"神经细胞球";随着培养时间的延长和多次传代换液,细胞增殖迅速,神经细胞球数目明显增多.②脊髓神经干细胞的分化与鉴定:将神经球转入含体积分数为0.1的胎牛血清的培养液中,数小时内迅速贴壁并开始分化,5 d后分化的细胞呈现出3种典型的神经细胞形态;免疫细胞化学检测神经细胞球巢蛋白染色阳性及其分化的神经元和星型胶质细胞微管相关蛋白、胶质纤维酸性蛋白分别染色阳性.结论:新生小鼠脊髓存在具有多分化潜能的神经干细胞,它们可以在体外大量增殖,经过诱导可朝神经元和胶质细胞的方向分化.
关键词：脊髓干细胞细胞培养中间丝蛋白质类小鼠
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30571881)安徽省自然科学基金(050430713)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 4-6,插图41-1 )
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