克隆化兔骨髓基质干细胞系的建立及其生物学特性
房国坚
边敏章
贺晨
张文元
杨亚冬
陈勇
1.浙江省医学科学院,浙江省杭州市,3100132.浙江省医学科学院,浙江省杭州市,3100133.浙江省医学科学院,浙江省杭州市,3100134.浙江省医学科学院,浙江省杭州市,3100135.浙江省医学科学院,浙江省杭州市,3100136.浙江省医学科学院,浙江省杭州市,310013
摘要：目的:建立克隆化兔骨髓基质干细胞系,为组织缺损修复研究寻找理想的种子细胞提供新的途径.方法:实验于2004-09/2005-12在浙江省医学科学院生物工程研究所完成.①取3个月龄新西兰白兔,无菌抽取骨髓液,经密度梯度离心和贴壁培养,获得原代培养骨髓基质干细胞.用有限稀释法进行克隆化培养,选择单细胞克隆增殖细胞,进行扩大培养和液氮冻存保种.②取对数生长期第2,15和32代克隆化骨髓基质干细胞,用四甲基偶氮唑盐法测定其吸光值(A值),绘制生长曲线.③取第4和32代对数生长期骨髓基质干细胞,按常规方法制作染色体标本,进行染色体分析.④取第5代对数生长期骨髓基质干细胞,用成骨诱导试验进行体外分化潜能鉴定.⑤取第5代对数生长期的骨髓基质干细胞,按常规方法测定最适细胞接种密度.结果:①克隆化兔骨髓基质干细胞系的建立结果:获得一株克隆化兔骨髓基质干细胞系,其细胞形态为均一的长梭形,体外连续传代培养至32代,细胞仍保持旺盛的增殖能力.经-196℃冻存复苏后仍保持良好的生长状态.②生长曲线:克隆化骨髓基质干细胞的第2,15和32代细胞生长曲线基本相同,细胞增殖速度没有明显的下降趋势.③染色体分析:第4和32代克隆化兔骨髓基质干细胞的染色体众数均为44条,结构未见异常.显示该细胞在体外经过32代培养,仍保持稳定的二倍体核型.④最适接种密度:第5代对数生长期骨髓基质干细胞,经常规方法测定,以1×103/cm2的接种密度为最适接种密度.⑤体外分化潜能:第6代克隆化骨髓基质干细胞,在向成骨细胞诱导条件下,4,8,12碱性磷酸酶的表达均显著高于对照组[(375.41±13.17)比(239.38±7.33)nkat/L,(503.77±13.34)比(249.22±5.17)nkat/L,(605.95±10.84)比(298.73±8.17)nkat/L,P＜0.01];茜素红染色显示有钙化结节形成,对照组为阴性.表明克隆化兔骨髓基质干细胞具有体外诱导分化潜能.结论:采用克隆化分离技术,成功获得了单细胞克隆的具有旺盛增殖能力和分化潜能,遗传性能稳定的兔骨髓基质干细胞系.
关键词：克隆细胞间质干细胞细胞系
分类号：R3(基础医学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-3,插1 )
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