脑源性神经营养因子基因修饰人骨髓间充质干细胞有限细胞系的建立
苏平1
卢昌均1
赵连旭2
李艳华2
管利东2
王韫芳2
陆兵勋1
裴雪涛2
1.南方医科大学南方医院神经内科,广东省广州市,5105152.解放军军事医学科学院野战输血研究所,北京市,100850
摘要：目的:建立脑源性神经营养因子基因修饰的人骨髓间充质干细胞系.方法:实验于2004-02/2005-06在解放军军事医学科学院干细胞研究中心完成.人类骨髓细胞来源于解放军三○七医院骨髓移植治疗的6名健康成年骨髓供者,男3名,女3名,年龄25～45岁.常规分离培养人骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测骨髓间充质干细胞表面分子CD34、CD44、CD45,采用重组逆转录病毒载体将脑源性神经营养因子基因转入人骨髓间充质干细胞.检测脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞的增殖特性,细胞内脑源性神经营养因子的蛋白表达,细胞培养液中脑源性神经营养因子含量,以及PCR检测脑源性神经营养因子-骨髓间充质干细胞中外源性脑源性神经营养因子基因DNA.结果:①人工分离培养出的骨髓间充质干细胞,形态、大小一致,呈长梭型或长多边形,从P0至P20基本保持一致,P2代骨髓间充质干细胞表达基质细胞表面标志CD44,不表达造血系细胞表面标志CD34、CD45.②反转录病毒感染骨髓间充质干细胞的感染效率约为10%,修饰后形成的脑源性神经营养因子-骨髓间充质干细胞在形态上始终保持一致,与骨髓间充质干细胞几乎完全一样,生长速率与未经基因修饰的骨髓间充质干细胞基本相同,培养10代后细胞停止分裂,免疫细胞化学染色显示脑源性神经营养因子-骨髓间充质干细胞的脑源性神经营养因子阳性率超过98%,培养72 h后培养基中脑源性神经营养因子的含量较之骨髓间充质干细胞提高约20 000倍.③PCR对脑源性神经营养因子-骨髓间充质干细胞基因组DNA进行扩增,得到外源性脑源性神经营养因子条带.结论:利用反转录病毒载体进行基因修饰得到了稳定的脑源性神经营养因子基因修饰的人骨髓间充质干细胞有限细胞系,为基因治疗提供了一种以多潜能成体干细胞为载体的种子细胞.
关键词：脑源性神经营养因子骨髓细胞干细胞生物基因修饰
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2005AA219010)国家重点基础研究发展计划（973计划）(2001CB509906)北京市科委科研项目(H020220010190)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 14-17,插1 )
英文信息