人胚胎神经干细胞分离、培养、纯化及增殖潜能的特点
李英博
王莎莉
刘永刚
李芳菲
王亚平
1.重庆医科大学基础医学研究所,重庆市,4000162.重庆医科大学基础医学研究所,重庆市,4000163.重庆医科大学基础医学研究所,重庆市,4000164.重庆医科大学基础医学研究所,重庆市,4000165.重庆医科大学基础医学研究所,重庆市,400016
摘要：目的:探讨获取和培养人胚胎神经干细胞的方法.方法:实验于2003-09/2004-12在重庆医科大学基础研究所完成.人胚胎来源为7～12周人工药物流产胎儿,由重庆医科大学附属第二医院及重庆市妇幼保健院提供,征得产妇本人同意.①从人胚胎大脑皮质中分离、培养、纯化原代神经干细胞,经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的神经干细胞.②免疫细胞化学鉴定神经干细胞特异性表达抗原.③观察不同种植细胞密度对神经干细胞增殖的影响,分析其生长特点并绘制生长曲线.④采用悬浮细胞培养法扩增细胞,冷冻复苏后观察细胞的生物学特性.结果:①人胚胎神经干细胞体外生长特点:从7～12周流产胎儿大脑皮质中获得了能在体外长期生存的神经干细胞.经体外传至15代,神经干细胞细胞数量扩增至200倍.②神经干细胞接种密度对增生的影响:当种植细胞的密度为1×105 L-1,1×107 L-1时,体外培养30 d后仍呈单细胞贴壁状态.以1×109 L-1细胞密度接种时,12 h后即见多个单细胞聚成的小球,悬浮生长.③神经干细胞自我更新能力的检测结果:多数单个细胞在培养后24～48 h分裂为2～4个细胞的小克隆,7～10 d均发展为上百个细胞的较大的克隆.④nestin抗原的表达:培养的神经干细胞神经球nestin免疫细胞染色均呈阳性.⑤神经干细胞多向分化能力检测:NSE和GFAP免疫细胞化学染色显示,被测细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着,呈阳性表达.⑥神经干细胞复苏后的存活率:冻存1,4,8,12周的神经干细胞存活率基本相似[(80.2±1.8)%,(80.1±1.2)%,(79.9±0.8)%,(80.1±2.1)%,P＞0.05].结论:成功地从人胚胎大脑皮质中分离得到了神经干细胞.经体外培养证明:人胚胎神经干细胞具有自我更新增殖能力和向神经元样细胞、星形胶质样细胞分化的潜能.
关键词：干细胞神经系统/细胞学胚胎大脑皮质细胞分化
分类号：R3(基础医学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 21-23,封面 )
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