应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点
高楠1
黄冰1
葛坚1
王智崇1
陈系古2
张可飞1
彭展1
李彦峰1
1.中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室,广东省广州市,5100602.中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室,广东省广州市,510060;广州医学院荔湾医院,广东省广州市,510060
摘要：目的:探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞,为组织工程学的进一步研究奠定基础.方法:实验于2005-07/12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成.健康3个月龄恒河猴2只,分离与培养猴表皮细胞,获取第2～4代的细胞,消化后,将细胞重新放回原瓶中,培养箱中静置20 min,获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞.①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞.②对20 min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测,以未经吸附分选的细胞作为对照.③20 min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片,进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色.④20 min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1(K10对应角蛋白)的mRNA反转录聚合酶链反应的检测.结果:①分选后的细胞体积较小,核浆比例较大.②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主(α6bri CD71dim 为82.5±1.641),也含有少量的短暂扩增细胞(α6bri CD71bri 为4.9±2.125),有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到(α6dim).③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性,K10阴性;分选后未黏附细胞K10为阳性,而K15和整合素β1均为阴性.④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素,K10没有表达;而分选后剩余的细胞只表达K10.结论:原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法.
关键词：表皮干细胞细胞分离
分类号：R3(基础医学)
资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金(20030558074)国家科技攻关计划(2004BA720A15)国家高技术研究发展计划（863计划）(2003AA205005)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 39-42,插3 )
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