狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库的构建
李玉萍1
罗仁1
赵晓山2
聂晓莉1
李俊1
1.南方医科大学中医药学院,广东省,广州市,5105152.广州中医药大学消化内科,广东省,广州市,510405
摘要：目的:采用抑制性消减杂交技术构建汉族人狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库. 方法:选择2005-08/10南方医科大学南方医院中医科收治的狼疮性肾炎肾阳虚证患者5例,另选择与上述年龄相匹配的健康正常人5名作为正常对照组.狼疮性肾炎肾阳虚证患者组和正常对照组进行正向和反向消减杂交.采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART(SwitchMechanism At 5 end of RNA Template)技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaⅠ酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用聚合酶链反应方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建狼疮性肾炎肾阳虚证消减文库.结果:TRIzol一步法抽提的总RNA纯度高(A250nm/A280nm＞1.90),用SMART技术扩增微量RNA,扩增产物双链cDNA主要分布在0.5～10kb,基因组cDNA经RsaⅠ内切酶酶切后片段主要集中在200～2 000 bp.用抑制性消减杂交方法筛选出了狼疮性肾炎肾阳虚证的差异cDNA片段,得到了480个白色克隆,再经聚合酶链反应方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了狼疮性肾炎肾阳虚证的cDNA消减文库.结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建狼疮性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆狼疮性肾炎肾阳虚证相关基因奠定了基础.
关键词：狼疮肾炎肾阳虚杂交基因组文库
分类号：R2(中国医学)
资助基金：广东省中医药局科研项目(1050130)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 4-7 )
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