人与鼠神经干细胞体外培养特性的比较
祝畅1
刘志恒2
桂伶俐1
高峰1
张传汉1
1.华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科,湖北省武汉市,4300302.深圳市第二人民医院麻醉科,广东省深圳市,518035
摘要：目的:比较分析人及鼠神经干细胞体外培养的生长特性.方法:实验于2004-04/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科实验室完成.孕14 d及新生Wistar大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,孕9周及孕16周水囊引产胎儿经胎儿家属同意捐赠,用1×1010 L-1或1×108 L-1的起始密度分离培养人和鼠神经干细胞.原代培养出现大量悬浮神经干细胞球后,一部分细胞继续悬浮培养,另一部分细胞种人用0.001%多聚鸟氨酸和0.2%明胶包被的培养瓶中贴壁培养.在培养9代左右的人神经干细胞及4代左右的鼠神经干细胞培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷或5%胎牛血清继续培养1周.应用抗巢蛋白及抗5-溴脱氧尿嘧啶核苷作为人及鼠神经干细胞初步鉴定,应用抗神经胶质酸性蛋白、微管相关蛋白2和2,3-环核苷酸磷酸二脂酶抗体检测其分化,SABC法进行免疫细胞化学染色.结果:①用较高(1×1010 L-1)起始密度可有效的分离培养原代人神经干细胞,较低(1×108 L-1)的起始密度对鼠神经干细胞分离有利,贴壁培养的人及鼠神经干细胞保持干细胞的特性长期增殖.②人神经干细胞自发聚集能力强、培养维持时间长,相比较而言,鼠神经干细胞单个细胞体积大、分裂增殖快、对起始密度依赖性小、贴壁能力强.③悬浮培养及贴壁培养的人和鼠神经干细胞,经抗巢蛋白及抗5-溴脱氧尿嘧啶核苷免疫细胞化学染色,均显示阳性.血清诱导分化后,免疫细胞化学染色可显示出微管相关蛋白2、神经胶质酸性蛋白染色阳性的细胞,人与鼠神经干细胞分化后2,3-环核苷酸磷酸二脂酶的染色效果不佳.结论:人神经干细胞和鼠神经干细胞体外培养时生长特性有较大差异.表现为前者需要较高的起始培养密度、聚集能力强、培养维持时间长,后者单个细胞体积大、分裂增殖较快、贴壁能力强.
关键词：神经科学干细胞细胞培养技术
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30300328)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1216-1218,1401 )
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