免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-
张春兴1
廖彩仙1
张守华1
苏俊1
周杰1
朱槿2
肖菊花3
1.南方医科大学南方医院肝胆外科,广东省广州市,5105152.宿迁市中心血站,江苏省宿迁市,2238003.南昌大学医学院第一附属医院超声科,江西省南昌市,330006
摘要：目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-.方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成.6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20 g.收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8 ℃条件下1 500 r/min离心10 min,弃上清,接80 μL/107加入Buffer重悬细胞.按20 μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4 ℃冰箱孵育15 min,按1 mL/107加入Buffer洗细胞1次,8 ℃条件下1 500 r/min离心10 min,弃上清,按500 μL/108加入Buffer重悬细胞.Buffer 500 μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer 500 μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1 mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-Kit+lin-细胞,细胞计数.取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力.计算活细胞的百分率.细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%.结果:10只小鼠均进入结果分析.利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响.结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回放率高,且不影响细胞活力.
关键词：骨髓肝细胞/代谢干细胞免疫磁珠
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30371385)广东省自然科学基金(04020419)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1232-1234 )
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