原子力显微镜观测人血小板与Ⅰ型胶原膜相互作用过程中的形态学变化
胡怡1
蔡继业1
吴扬哲1
王小平2
1.暨南大学,化学系,广东省广州市,5106322.暨南大学,第一附属医院麻醉科,广东省广州市,510632
摘要：目的:利用原子力显微镜从可视化的角度观察人血小板与Ⅰ型胶原膜相互作用后受激活化过程中的形态学变化.方法:实验于2006-06/08在暨南大学生物纳米技术实验室完成.①人血小板的提取:新鲜血液由健康无服药志愿者提供.抗凝剂(38 g/L枸橼酸钠)与血液以1:9的比例800 r/min离心5 min,将上层血浆以3 000 r/min离心10 min,弃上清,加入生理盐水以3 000 r/min离心洗涤3次留沉淀.37℃下静置30 min.所有操作均在室温下进行,pH为74.②Ⅰ型胶原膜的制备:把新鲜剥离的带负电的云母浸入NiCl2溶液中,使其表面带正电荷,通过静电作用将Ⅰ型胶原组装其上,室温下干燥.③血小板形态的观测:将新分离的血小板均匀铺展在膜材上与之作用,作用后用25 g/L戊二醛固定10 min,再用超纯水漂洗,室温下干燥后原子力显微镜观测.结果:①Ⅰ型胶原膜的表面形貌观察结果:胶原膜呈网孔状,胶原纤维清晰可辨;未受激血小板表面形貌观察结果:为了排除血小板在分离等前处理过程中受到激活的可能,对直接用戊二醛固定的血小板进行成像发现:约95%的血小板未被激活,血小板呈分散分布.对单个血小板的扫描成像发现血小板呈扁平圆盘状,表面比较平滑,血小板之间较分散,无聚集及伪足等活化标志.②Ⅰ型胶原膜上血小板形貌观测结果:与Ⅰ型胶原作用后立刻用原子力显微镜观测,发现血小板聚集现象并不显著,仅在小范围内出现了交联聚集的现象.通过扫描样品上不同位置的血小板聚集体,发现血小板表面有许多呈平行排列的纤维束,它们把血小板整齐的连接起来,且血小板间层层相叠;这些嵌入在纤维蛋白原网内的血小板,大多保持了圆盘状的结构,但表面都分布着颗粒状或纤维条状物质;与Ⅰ型胶原作用1 h后用原子力显微镜观测,发现单个血小板大多处于活化过程中的树突型,伸出了伪足,并有着彼此间相互聚集的趋势,通过对血小板超微结构的观察发现其中心分布着大小不一的团簇状物质.在每个血小板周围,都有许多分泌物,这些分泌物有着不断向血小板外部扩散的趋势,而且扩散的方向多指向另一血小板.结论:①通过原子力显微镜对Ⅰ型胶原诱导活化的血小板形态结构的变化研究发现,其内部α颗粒释放时带出的纤维蛋白原同样也可导致血小板的聚集.②通过对血小板受激活化的体外模拟,可为血小板的凝血过程与及机制的研究以及(抗)凝血生物材料的开发提供参考.
关键词：Ⅰ型胶原血小板纤维蛋白原形态学结构原子力显微镜
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30230350)国家自然科学基金(30540420311)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1647-1650 )
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