分离纯化牛嗜铬细胞方法改进
雄鹰1
张晓慧2
梁丰1
郭昕2
王为2
马小军2
1.解放军第二一○医院神经内科,辽宁省大连市,1160212.中科院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,辽宁省大连市,116023
摘要：目的:建立一种稳定、经济、简单的牛肾上腺髓质嗜铬细胞体外分离、纯化方法,为临床移植提供充足、健康的细胞来源.方法:实验于2004-01/2005-12在中科院大连化学物理研究所生物医学材料工程组实验室完成.将胶原酶消化法和机械分离法结合,分离新生牛嗜铬细胞;采用Percoll非连续密度梯度离心法纯化新生牛嗜铬细胞.采用相差显微镜观察牛嗜铬细胞形态,椎虫蓝排斥染色观察牛嗜铬细胞活性,组织化学染色鉴定牛嗜铬细胞属性和纯度,免疫组化染色观察牛嗜铬细胞的功能活性.结果:①健康的牛嗜铬细胞集中在一定密度的两层分离介质之间,红细胞完全沉降于离心管底部,而皮质细胞和细胞碎屑则分散在特定密度的分离介质中.②平均每个牛肾上腺可分离得到(0.7～3.1)×108个牛嗜铬细胞.③将分离得到的牛嗜铬细胞进行椎虫蓝排斥染色,显示新鲜分离的牛嗜铬细胞存活率大于99%,具有合成儿茶酚胺的功能活性.结论:机械分离结合胶原酶灌注消化法分离牛嗜铬细胞后,经Percoll非连续等密度梯度离心可以有效纯化牛嗜铬细胞,分离的细胞数量多,纯度高,有合成儿茶酚胺的功能活性.
关键词：肾上腺髓质/细胞学嗜铬颗粒细胞分离
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30472102)大连市科技计划(2004B3SFF161)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 2219-2222,2232 )
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