大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进
田映红1
李树基2
李晓文2
高天明2
1.南方医科大学基础医学院生理教研室,广东省广州市,5105152.南方医科大学基础医学院神经生物学教研室,广东省广州市,510515
摘要：目的:改进培养大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法,并通过兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂进行验证.方法:实验于2004-09/2005-06在南方医科大学基础医学院神经生物学教研室进行.实验材料:出生1 d内清洁级SD大鼠,由南方医科大学实验动物中心提供(合格证号为粤证监字2004B023号).N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801)和D-2-氨基-5-磷酰基戊酸(d-APV)购自Sigma公司.实验方法:取新生1 d SD大鼠海马组织作神经细胞分散细胞原代培养,培养到13 d时进行氧/葡萄糖剥夺模型的制备:将neurobasal培养基更换为不含葡萄糖的BSSo培养基,连续充以50 mL/L CO2+950 mL/L N2(体积比)混合气体.缺氧30,45,60,90 min后取出细胞,更换为正常neurobasal培养基,恢复正常条件继续培养.将神经细胞随机分为正常对照组、单纯缺氧组、无糖缺氧组、MK-801组和d-APV组.将10 μmol/L MK-801和500 μmol/L d-APV在通50 mL/L CO2+950 mL/L N2混合气前加入到BSSo培养基,缺氧结束后随BSSo培养基一起去掉.复氧24 h后采用MTT比色法测神经细胞成活率及Hoechst荧光染料法测神经细胞凋亡率.结果:①随着氧/葡萄糖剥夺时间延长,神经细胞存活率下降.氧/葡萄糖剥夺30,45,60,90 min再复氧24 h,神经细胞存活率分别为(81.48±3.84)%、(63.14±3.14)%、(41.73±2.97)%和(16.78±2.12)%.②N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(10 μmol/L)和d-APV(500 μmol/L)均能明显增加神经细胞存活率(P＜0.05),并且两组细胞存活率与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:实验制备的海马神经细胞短时间氧/葡萄糖剥夺模型可对神经细胞造成迟发性死亡,兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂可保护氧/葡萄糖剥夺诱导的神经细胞损伤,说明本实验建立的缺氧模型有效并简便可靠,并且缩短了缺氧时间.
关键词：缺氧模型海马神经元培养凋亡
分类号：R742.1(神经病学与精神病学)
资助基金：国家自然科学基金(30330240)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2810-2813 )
英文信息